QPCR阴性对照有扩增怎么回事?
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发布时间：2024-10-24 13:18
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热心网友
时间：2024-10-25 14:37
QPCR阴性对照出现扩增现象，意味着实验可能存在某些问题。研载生物科技（上海）有限公司为您解答，NTC（将H2O代替模板的阴性对照反应）有扩增，情况可能有两种：
1）如果Ct值大于35，熔解曲线Tm值低于80℃，这可能是由于引物二聚体导致的。引物二聚体是指引物在PCR过程中形成的非特异性双链，通常情况下，正常qPCR产物的大小在100-300bp之间，熔解曲线Tm值应该在80℃以上。为了解决这个问题，可以尝试进一步优化引物。
2）如果Ct值小于35，说明反应体系可能被污染。此时，需要逐步排查污染源。
对于NRC（将未反转录的RNA作为模板的阴性对照反应），若NRC有Ct值，而NTC正常，这可能表示RNA中存在gDNA污染。建议使用DNase I消化或选择含有gDNA去除的反转录试剂盒，以减少污染。
研载生物提供QPCR实验服务，具备丰富经验。如果您遇到相关问题，欢迎随时咨询。
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