如何设计引物
发布网友
发布时间：2022-04-19 17:42
我来回答
共1个回答
热心网友
时间：2022-04-16 16:29
一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的。
至于设计引物的一般原则如下：
*
序列选取应在基因的保守区段
*
避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构
*
典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。
*
Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%
*
引物之间的TM相差避免超过2℃
*
引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基
*
为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。
*
Taqman探针PCR要求片段长度在80bp－150bp
*
引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。
声明：本网页内容为用户发布，旨在传播知识，不代表本网认同其观点，若有侵权等问题请及时与本网联系，我们将在第一时间删除处理。E-MAIL:11247931@qq.com