PCR实验操作注意事项有哪些

发布网友 发布时间：2022-04-20 04:40

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热心网友 时间：2022-05-10 16:52

1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室。

2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求

荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。

3、必须通过国家临床检验中心的验收和认证。

4、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书;PCR实验室内工作人员必须参加由国家卫生部或各省临床检验中心举办的临床基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“临床基因检测上岗证”。

5、必须在无菌无尘环境下进行操作PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合国家卫生部的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行。

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PCR实验的应用价值：

能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控，并结合抗HBV与T细胞免疫来打破免疫耐受，阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒，解决了乙肝病毒易变异、耐药，病毒复制模板难以治疗。

人体免疫耐受状态不易打破等医学难题，能迅速消除临床症状，而且有效抑制乙肝病毒复制，明显加快e抗原、抗体的血清转换速度，杀灭血液及肝细胞内的病毒，为防止再感染提供了长期保护，有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。

参考资料来源：百度百科-PCR实验室

热心网友 时间：2022-05-10 18:10

1、必须在无菌无尘环境下进行操作；

2、检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书；

3、必须拥有标准的的PCR荧光实验室；

4、后PCR区PCR完成以后，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。

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PCR实验特点：

1、灵敏度高：PCR实验产物的生成量是以指数方式增加的，能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU；在细菌学中最小检出率为3个细菌。

2、简便、快速：PCR实验反应一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

3、纯度要求低：不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。

参考资料来源：百度百科-PCR实验室

热心网友 时间：2022-05-10 19:45

实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：
(1)戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。
(2)使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染。
(3)避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(4)操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度。
(5)最后加入反应模板，加入后盖紧反应管。
(6)操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性。
(7)尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区。
(8)重复实验，验证结果，慎下结论。

热心网友 时间：2022-05-10 21:36

BIOG-qPCR反应灵敏性高，模板量的准确性对结果影响很大，建议将模板适度稀释后加入，或用50ul反应体系。模板体积最好不超过反应体积的10%，操作尽量在超净台中进行，以防气溶胶污染。扩增产物长度选择在100bp-500bp范围内，最好为100-200bp。 配制反应体系时，避免震荡混匀，以防气泡产生。反应条件：95℃加热6-10分钟，以激活热启动DNA聚合酶，然后95℃ 5-15秒，55-60℃ 30-60秒，40-45个循环。反应条件可根据目标片段的大小、引物的Tm值等适当调整。