二辛可酸法相对于其他分析方法的显著优点是什么

发布网友发布时间：2022-04-20 03:45

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热心网友时间：2022-07-14 05:41

符合。
BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应,使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。
原理：蛋白质中含有色氨酸与酪氨酸残基，这两种氨基酸残基具有吸收紫外光的性质，它们的紫外光吸收谱峰值在280nm附近。某些蛋白质含有二硫键，也会在280nm附近吸收紫外光。近紫外吸收法就是根据这个性质，对蛋白质进行定量。因为不同的蛋白质中所含有的色氨酸与酪氨酸的数量存在很大的差异，所以蛋白质在280nm处的吸光度4zso也存在非常大的差异。比如，当蛋白质浓度为1mg/ml时，吸光度4pso可为0-4之间的任何值。但是，大部分的蛋白质的吸光度A2so时0.5-1.5之间的某个值。该方法测定蛋白质的浓度具有明显的优缺点。这种方法操作简单，测定完成后,样品可以被回收，对buffer没有特殊要求，这是该方法的优点。该方法的缺点是:其他的生色基团会影响蛋白质吸收光谱的测定，比如核酸在该波长的紫外吸收能力非常强，少量的核酸就会对蛋白质吸光值的测定造成很大的干扰。同时，不同的蛋白质的消光系数需要在实验前确定。蛋白质浓度的计算:朗伯比尔定律：A(absorbance)=εcl,因此：c(mg/ml)=A/el(cm)。

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二辛可酸法相对于其他分析方法的显著优点是什么